13ª Semana Integrada do Instituto de Física de São Carlos

Estudo da interação do coiled-coil de septinas Cdc3-Cdc12 com peptídeos de proteínas Gic

21 de ago. de 2023 09:00

1h 30m

Salão de Eventos USP

Prêmio YPM 9h00 - 10h30

Descrição

Septinas são proteínas citoesqueléticas capazes de se ligar a nucleotídeos de guanina e participam de funções celulares diversas como exocitose, fagocitose, citocinese, entre outras, com presença em todos os metazoários e fungos. (1) Estruturalmente as septinas se destacam pela organização em complexos heteroligoméricos lineares que se unem em filamentos e em estruturas de maior complexidade. Em leveduras, temos o octâmero composto por Cdc11-Cdc12-Cdc3-Cdc10-Cdc10-Cdc3-Cdc12-Cdc11, no qual as septinas Cdc3 e Cdc12 estão associadas por uma interface do tipo NC, de forma que seus domínios C-terminais formam uma região de coiled-coil supostamente paralelo e heterodimérico. É fato que septinas interagem com outras proteínas, como as proteínas BORG's humanas, membros da família das efetoras da Cdc42, responsável por regular diversos processos do ciclo celular. Essas proteínas ligam-se ao coiled-coil da SEPT6-SEPT7, análogo ao da Cdc3-Cdc12, por um domínio chamado BD3. (2) As homólogas funcionais de BORG's em levedura são as chamadas Gic1 e Gic2. Desta forma, neste trabalho buscou-se estudar a interação entre o coiled-coil de Cdc3-Cdc12 com as Gic’s, predita pela modelagem do complexo em AlphaFold2, verificando se ocorre de forma análoga ao que se observa em humanos. Para isso, a interação dos domínios C-terminais das septinas Cdc3-Cdc12 com a região BD3 das Gic’s foi explorada por meio de espectroscopia por dicroísmo circular, utilizando uma análise comparativa da temperatura de melting dos complexos. (3) Os experimentos de desnaturação térmica foram conduzidos em diferentes ensaios, envolvendo também peptídeos Gic-BD3 mutados a fim de validar o modelo de interação.

Referências

1 CAVINI, I. A. et al. The structural biology of septins and their filaments: an update. Frontiers in Cell and Developmental Biology, v. 9, p. 765085-1-765085-25, Nov. 2021. DOI: https://doi.org/10.3389/fcell.2021.765085.

2 SHEFFIELD, P. J. et al. Borg/septin interactions and the assembly of mammalian septin heterodimers, trimers, and filaments. Journal of Biological Chemistry, v. 278, n. 5, p. 3483-3488, Jan. 2003. DOI: https://doi.org/10.1074/jbc.M209701200.

3 SALA, F. A. et al. Heterotypic coiled-coil formation is essential for the correct assembly of the septin heterofilament. Biophysical Journal, v. 111, n. 12, p. 2608-2619, Dec. 2016. DOI: https://doi.org/10.1016/j.bpj.2016.10.032.