13ª Semana Integrada do Instituto de Física de São Carlos

Estudo do mecanismo de inibidores da entrada viral e ensaio de neutralização por pseudovírus SARS-CoV-2 em laboratório BSL2

21 de ago. de 2023 10:30

1h 30m

Salão de Eventos USP

Normal 10h30 - 12h00

Descrição

Diferentes estratégias baseadas em luz foram investigadas para inativar vírus. Aqui, desenvolveu-se um modelo pseudotipado baseado em HIV de SARS-CoV-2 (SC2) para estudar os mecanismos de inativação do vírus usando duas estratégias diferentes; fotoinativação (FI) por luz UV-C e inativação fotodinâmica (IFD) com o fotossensibilizador fotoditazina (PDZ). Usou-se duas partículas pseudovirais que abrigam o gene repórter Luciferase-IRES-ZsGreen com um pico do SARS-CoV-2 na membrana ou sem spike como um pseudovírus naked control. O mecanismo de inativação viral por UV-C e PDI baseado em PDZ foram estudados por meio de caracterizações bioquímicas e PCR quantitativo em quatro níveis; danos virais de células livres; entrada de células virais; integração de DNA; e expressão de genes repórteres. Os tratamentos UV-C e PDZ podem destruir o RNA de fita simples (ssRNA) e a proteína spike do vírus, com proporções diferentes. No entanto, o vírus ainda foi capaz de se ligar e entrar nas células HEK 293T que expressam a enzima conversora de angiotensina 2 (ACE-2). Uma maneira dependente da dose de irradiação UV-C danifica principalmente o ssRNA, enquanto a IFD baseada em PDZ destrói principalmente o pico e a membrana viral em concentração e maneiras dependentes da dose. Observou-se que as células infectadas pelo vírus e tratadas com UV-C ou PDI à base de PDZ não expressaram o gene repórter da luciferase, significando a inativação viral, apesar da presença de genes de RNA e DNA intactos. Uma maneira dependente da dose de irradiação UV-C danifica principalmente o ssRNA, enquanto a PDI baseada em PDZ destrói principalmente o spike e a membrana viral em concentração e maneiras dependentes da dose. Observamos que as células infectadas pelo vírus e tratadas com UV-C ou PDI à base de PDZ não expressaram o gene repórter da luciferase, significando a inativação viral, apesar da presença de genes de RNA e DNA intactos. Uma maneira dependente da dose de irradiação UV-C danifica principalmente o ssRNA, enquanto a PDI baseada em PDZ destrói principalmente o pico e a membrana viral em concentração e maneiras dependentes da dose. Observamos que as células infectadas pelo vírus e tratadas com UV-C ou PDI à base de PDZ não expressaram o gene repórter da luciferase, significando a inativação viral, apesar da presença de genes de RNA e DNA intactos. (1-2)

Referências

1 SADRAEIAN, M. et al. Study of viral photoinactivation by UV-C light and photosensitizer using a pseudotyped model. Pharmaceutics, v. 14, n. 3, p. 683-1-683-15, Mar. 2022. https://doi.org/10.3390/pharmaceutics14030683.

2 CRAWFORD, K. H. D. et al. Protocol and reagents for pseudotyping lentiviral particles with SARS-CoV-2 spike protein for neutralization assays. Viruses, v. 12, n. 5, p. 513-1-513-15, May 2020.