Descrição
O vírus Zika (ZIKV) é responsável pela febre zika, uma arbovirose que se tornou um problema de saúde pública em 2015/2016, principalmente no Brasil, relacionado a casos de microcefalia e síndrome de Guillain-Barré. A falta de tratamentos específicos e vacinas disponíveis explicita a necessidade de desenvolvimento de tratamentos eficazes. (1) O domínio da protease NS3, que requer NS2B como seu co-factor, é responsável pela clivagem da poliproteína viral imatura nas proteínas NS maduras, representando assim um alvo interessante para o desenvolvimento de medicamentos. O uso de ensaios baseados em enzimas virais, como a protease de ZIKV (NS2B-NS3pro), é uma estratégia eficaz para triagem de bibliotecas de compostos em busca de inibidores. O objetivo deste trabalho é identificar e caracterizar compostos com ação anti-ZIKV. Inicialmente será feita a expressão e purificação da protease recombinante de ZIKV a partir do plasmídeo bZiPro (Addgene), em seguida será feita a avaliação em formato de triagens de alta performance de bibliotecas de compostos contra o complexo ZIKV NS2B-NS3pro, por meio de ensaios enzimáticos, este que será realizado manualmente e consistirá em medir a fluorescência obtida pela reação entre a NS2B-NS3pro e o substrato comercial BZ-NKRR-AMC (International Peptides), que resulta na liberação de 7-amino-4-metilcumarina (AMC). (2) Os compostos que inibirem o complexo serão validados em ensaios celulares com o replicon subgenômico de ZIKV, um sistema auto-replicativos nos quais os genes que codificam as proteínas estruturais do vírus são substituídos por um gene repórter, como uma luciferase, será utilizada a linhagem de células de mamíferos previamente desenvolvida pelo grupo de pesquisa, denominada BHK-21-RepZIKV_IRES-Neo, que expressa o replicon subgenômico de ZIKV contendo a Renilla luciferase como proteína repórter. (3) Dessa forma, os efeitos inibitórios dos compostos na replicação do RNA viral podem ser facilmente avaliados medindo-se a redução dos sinais luminescentes ou fluorescentes.
Referências
1 WOLFORD, R. W.; SCHAEFER, T. J. Zika virus. Treasure Island: StatPearls, 2023.
2 FERNANDES, R. S. et al. High-throughput antiviral assays to screen for inhibitors of Zika Virus replication. Journal of Visualized Experiments, v. 176, p. e62422-1-e62422-11, Oct. 2021. DOI: http://dx.doi.org/10.3791/62422.
3 FERNANDES, R. S. et al Discovery of an imidazonaphthyridine and a riminophenazine as potent anti-Zika virus agents through a replicon-based high-throughput screening. Virus Research, v. 299, p. 198388-1-198388-9, July 2021. DOI: http://dx.doi.org/10.1016/j.virusres.2021.198388.
| Certifico que os nomes citados como autor e coautor estão cientes de suas nomeações. | Sim |
|---|---|
| Palavras-chave | Zika. Descoberta de drogas. Protease. |
| Orientador e coorientador | Glaucius Oliva. Rafaela Sachetto Fernandes |
| Subárea 1 | Biofísica |
| Subárea 2 (opcional) | Cristalografia |
| Agência de Fomento | FAPESP |
| Número de Processo | 2022/16111-5 |
| Modalidade | DOUTORADO |
| Concessão de Direitos Autorais | Sim |
