Palestrante
Descrição
Durante os últimos anos o Brasil voltou a apresentar surtos de febre amarela em regiões próximas aos grandes centros urbanos, o que deixou mais de duas mil mortes e milhões em risco de contrair a infecção viral. Uma campanha em massa foi realizada a fim de vacinar a população e evitar a propagação do vírus para a região urbana. (1) A falta de um tratamento para a febre amarela é um grande problema de saúde pública, uma vez que quando as pessoas infectadas atingem os níveis mais severos da doença, os índices de mortalidade podem atingir 50%. (2) O vírus da febre amarela é um membro da família Flaviviridae, com genoma constituído por uma única fita positiva de RNA que codifica por três proteínas estruturais e outras sete não estruturais. A proteína não-estrutural NS5 do vírus da febre amarela contém dois domínios que desempenham funções centrais para a replicação do RNA viral na célula infectada: um domínio tipo RNA polimerase RNA-dependente (RpRd) e um domínio metiltransferase. O bloqueio específico de qualquer uma destas funções é letal para a replicação viral, tornando essa proteína um alvo promissor para a procura de novos fármacos. (3) Neste projeto é proposto a elucidação estrutural do domínio RpRd da NS5 de febre amarela, seguida da procura por ligantes para essa enzima utilizando a estratégia de planejamento baseado na estrutura do receptor. A fim de obter cristais para difração em raio-x o domínio RdRp da NS5 de febre amarela foi expresso heterologamente em S. cerevisiae utilizando o vetor de expressão pBEVY-GU e purificada por cromatografia de afinidade por níquel seguida de cromatografia de exclusão molecular. Os ensaios de cristalização foram realizados utilizando kits de matriz esparsa ou com condições específicas utilizando o método de hanging drop ou sitting drop. Até o momento foi possível obter cristais da proteína em duas condições diferentes, sendo necessário reproduzi-los novamente para futura otimização. Além disso, a coleta dos dados de difração por raio-x dos cristais será realizada para verificar a sua qualidade e se possível, resolver a estrutura.
Referências
1 POSSAS, C. et al. Yellow fever outbreak in Brazil: the puzzle of rapid viral spread and challenges for immunization. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. doi: 10.1590/0074-02760180278. In press.
2 DOUAM, F.; PLOSS, A. Yellow fever virus: knowledge gaps impeding the fight against an old foe. Trends in Microbiology, v. 26, n. 11, p. 913-928, Nov. 2018.
3 SAMPATH, A.; PADMANABHAN, R. Molecular targets for flavivirus drug discovery. Antiviral Research, v. 81, n. 1, p. 6-15, Jan. 2009.
| Subárea | Cristalografia |
|---|---|
| Apresentação do trabalho acadêmico para o público geral | Não |
