Nona Semana Integrada do Instituto de Física de São Carlos

Avaliação dos efeitos estruturais e funcionais de diferentes inibidores da glutaminase C

Não agendado

20m

Mestrado

Palestrante

Sra Camila Tanimoto (Universidade de São Paulo)

Descrição

Devido a proliferação celular descontrolada, células tumorais apresentam maior demanda energética e biossintética. Uma adaptação metabólica característica dessas células é a preferência pela via glicolítica, mesmo na presença de oxigênio.(1) Essas adaptações acarretam no aumento de consumo de glutamina, convertida em glutamato pela enzima glutaminase para ser posteriormente metabolizado e alimentar a síntese de aminoácidos e lipídeos. Três diferentes tipos de glutaminases foram identificadas em mamíferos, sendo a glutaminase C (GAC) apontada como fundamental e tendo sido identificada em abundância em diferentes tipos de células tumorais.(2) Dessa forma, a GAC se mostra como uma forte candidata a alvo molecular em tratamentos terapêuticos de tumores. Neste contexto, o objetivo deste projeto é a avaliação do efeito de diferentes inibidores na atividade enzimática da GAC. Assim, pretende-se obter os parâmetros cinéticos através de ensaios de atividade da enzima na presença das moléculas candidatas e realizar estudos estruturais da GAC com estes inibidores. A partir da otimização dos ensaios de cristalização, pretende-se obter monocristais da proteína a fim de submetê-la futuramente a uma triagem de fragmentos (Fragment-based screening - XChem). Até o presente momento, foi realizada a expressão em larga escala através de sistema bacteriano e purificação da GAC através de diferentes cromatografias (afinidade, troca iônica e exclusão molecular) a fim de se obter um alto grau de pureza. Ensaios de atividade da proteína sem e com a presença do ativador fosfato inorgânico foram realizados, com o objetivo de verificar a atividade da proteína purificada e curvas de dose-resposta do inibidor padrão BPTES foram obtidos. A partir de diversas triagens com diferentes kits comerciais de cristalização, foram obtidos monocristais da proteína incubada com glutamato, com e sem a presença do inibidor BPTES, em diferentes condições, a serem submetidos à difração de raios-X.

Referências

1 FERREIRA, A. P. S. Entendendo o mecanismo de ativação e as diferenças cinéticas das enzimas kidney-type glutaminase e glutaminase C. 2013.109p. Dissertação (Mestra em Ciências) - Instituto de Biologia, Universidade Estadual de Campinas, 2013.
2 CASSAGO, A. et al. Mitochondrial localization and structure-based phosphate activation mechanism of Glutaminase C with implications for cancer metabolism. Proceedings of the National Academy of Science,v.109,n.4,p.1092-97,2012.doi:10.1073/pnas.11124.95109.