Nona Semana Integrada do Instituto de Física de São Carlos

Caracterização estrutural da proteína nsP4 RNA polimerase RNA-dependente do vírus Chikungunya e busca por agentes antivirais

Não agendado

20m

Doutorado

Palestrante

Sra Marjorie C. L. C. Freire (Instituto de Física de São Carlos, Universidade de São Paulo (USP))

Descrição

A febre Chikungunya, causada pelo vírus Chikungunya (CHIKV), é uma arbovirose transmitida para humanos através da picada de mosquitos do gênero Aedes sp. Os principais sintomas da fase aguda são febre, exantema, vômitos, edemas, além de dores articulares e musculoesqueléticas. A doença também apresenta uma fase crônica, caracterizada pela persistência das dores articulares por meses ou até anos, debilitando o paciente. (1) Até o momento não existe um tratamento específico contra a infecção viral. Portanto, existe a necessidade de se intensificar estudos que possam levar a novos candidatos a fármacos ou vacinas contra este vírus. O CHIKV é um vírus de RNA de cadeia positiva, do gênero Alphavirus, cujo material genético codifica duas poliproteínas; uma estrutural e outra não estrutural. Após clivadas essas dão origem a nove proteínas maduras. Destas, três formam o envelope viral (E1, E2 e E3), uma o capsídeo (proteína C), e outras quatro proteínas não estruturais (nsP1, nsP2, nsP3 e nsP4) estão envolvidas no processo de replicação genoma viral. (2) A proteína não estrutural nsP4 é a RNA-Polimerase RNA-dependente (RdRp), que é considerada a principal proteína do complexo de replicação viral, exercendo papel crucial neste processo. Dessa forma, a nsP4 é considerada um interessante alvo para a busca e o desenho de novos fármacos inibidores e até o momento a sua estrutura tridimensional não foi elucidada. (3) Neste contexto, este projeto propõe a elucidação estrutural e a caracterização funcional da proteína nsP4, bem como a busca por ligantes que possam atuar como potenciais inibidores. Como resultados iniciais, foram realizadas as etapas de clonagem, expressão em larga escala em sistema heterólogo (E. coli) e purificação através de técnicas cromatográficas, possibilitando a obtenção da proteína pura. A nsP4 pura foi utilizada para a realização de ensaios de cristalização e algumas condições cristalizantes encontram-se em processo de otimização, visando obter cristais viáveis para os experimentos de difração de raio-X.

Referências

1 STAPLES, J. E.; BREIMAN, R. F.; POWERS, A. M. Chikungunya fever: an epidemiological review of a re-emerging infectious disease. Clinical Infectious Diseases, v. 49, n. 6, p. 942-948, 2009.
2 HERNANDEZ, R.; BROWN, D. T.; PAREDES, A. Structural differences observed in arboviruses of the alphavirus and flavivirus genera. Advances in Virology, v. 2014, p. 259382-1-259382-24, 2014. doi: 10.1155/2014/259382.
3 RASHAD, A. A.; MAHALINGAM, S.; KELLER, P. A. Chikungunya virus: emerging targets and new opportunities for medicinal chemistry. Journal of Medicinal Chemistry, v. 57, n. 4, p. 1147-1166, 2014.